Формула розрахунку розміру виглядає наступним чином: припустимо, що M є середнім числом колоній, підрахованим від найбільш розведеної складки 10 N з пластини 2YT/Carb (N становить від 1-8), розмір дорівнює 2M X 10 N+3 .
Який розмір бібліотек фагового дисплея? Розмір бібліотек імунних антитіл становить 5 × 108–2 × 109, а розмір наївних бібліотек може досягати 1011.
Порахуйте сині бляшки на тарілках. Помножте кожне число на коефіцієнт розведення для цього планшета, щоб обчислити титр фага в бляшкоутворюючих одиницях (БОЕ) на 10 мкл. Наприклад, якщо на пластині для розведення 109 є 91 pfu, результат титру становитиме 9,1 x 109 pfu/мкл для основного розчину.
Бібліотека фагових антитіл створюється клонування цих репертуарів як білків злиття з другорядним білком оболонки бактеріофага (білок гена 3) (10–12). Кожен отриманий фаг має функціональний білок антитіла на своїй поверхні та містить ген, що кодує антитіло, включене в геном фага.
Концепція в принципі проста: бібліотека фагових частинок, що експресують широке розмаїття пептидів, використовується для вибору тих, які зв'язують бажану мішень. Ниткоподібний фаг M13 є найбільш часто використовуваним вектором для створення бібліотек випадкового відображення пептидів.
Типи векторів
| Векторний тип | Розмір вставки (тисячі основ) |
|---|---|
| Косміди | до 45 |
| Бактеріофаг Р1 | 70 до 100 |
| P1 штучні хромосоми (PAC) | 130 до 150 |
| Бактеріальні штучні хромосоми (BACs) | 120 до 300 |