Інкубація первинного антитіла: після блокування первинне антитіло, специфічне до білка-мішені, інкубується з нітроцелюлозною мембраною. Це дозволяє первинному антитілу зв’язуватися з білком на мембрані.18 січня 2023 р
Перенесення білка з гелю на мембрану необхідне з двох причин: Мембрана краще керує, ніж крихкий гель. Краща доступність цільового білка на мембрані за допомогою макромолекул, таких як антитіла.
Після поділу білки електрофоретично переносяться на мембрану (електроблоттинг; з високою спорідненістю до білка), таким чином іммобілізація розділених білків, що дозволяє подальше зондування антитілами та забезпечує додаткову довговічність порівняно з гелями (Towbin et al.
Блокування є важливим для запобігання неспецифічної взаємодії між перенесеними білками, мембраною та наступними реагентами, що використовуються в експерименті. Неспецифічне зв'язування може призвести до фонового сигналу, який потім може заважати інтерпретації результату.
Оцінка білків імунної системи Проте здатність переносити білки, розділені за допомогою електрофорезу, на мембрану для подальшого аналізу використання специфічних імунологічних або молекулярних зондів значно покращує виявлення та характеристику білків з низьким вмістом.
Для виявлення або зондування ДНК, що містить послідовності, комплементарні іншим послідовностям ДНК або РНК, ДНК, розділену на гелі, спочатку потрібно перенести та зафіксувати на твердій основі, такій як нітроцелюлозна або нейлонова мембрана.